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關(guān)于液相色譜柱使用中的常見問題解答(二)

更新時間:2024-11-11      點擊次數(shù):170


關(guān)于液相色譜柱使用中的

常見問題解答

Question

1. 反相色譜柱,

初次使用如何活化?

采用純有機試劑(如甲醇、乙腈),從0.1mL/min流速慢慢提高到正常使用流速,沖洗總體積以20倍柱體積為宜,以便固定相能充分潤濕、碳鏈舒展開,使色譜柱的性能達到好狀態(tài),并觀察壓力和基線狀態(tài)。

柱體積計算參照公式:

柱體積=π*(I.D./2)2 *L*60%

常見的色譜柱規(guī)格的柱體積計算如下:

關(guān)于液相色譜柱使用中的常見問題解答(二)

Question

2.正相/HILIC色譜柱,

新柱使用如何活化?

正相色譜柱 (SIL, DIOL,CN,NH2)封存溶劑與質(zhì)控方法相關(guān),不同的封存溶劑活化存在差異,以島津現(xiàn)有的色譜柱為例,具體活化方法如下:(可點擊預(yù)覽大圖)

關(guān)于液相色譜柱使用中的常見問題解答(二)

不同方法如下:

關(guān)于液相色譜柱使用中的常見問題解答(二)

Question

3. HILIC模式色譜柱

如何清洗保存?

采用HILIC模式對樣品進行分離分析,一般用于分離大極性化合物,因此對于極性大、吸附太強的雜質(zhì),常規(guī)清洗效果不明顯,可以加大水比例,增加洗脫強度,先用純水:乙腈=50:50,清洗20倍柱體積,然后梯度過渡到95%乙腈清洗,并保存在該流動相中。


Question

4. 什么情況下反沖?

多采用什么方法反沖?

當流動相中使用了時間長,且緩沖鹽使用較多;或者等度高比例水相一段時間造成了柱頭嚴重污染,常規(guī)的沖洗難以達到一個好的效果,此時可以進行反沖。

反沖程序為0.3%的磷酸乙腈水(900mL乙腈+100mL水,再加3mL磷酸),反接色譜柱,0.5mL/min,沖洗2h,或者過夜處理。


Question

5. 選擇保護柱應(yīng)該注意什么?

保護柱怎么再生?

除非特殊情況,一般選擇填料基質(zhì)與分析柱基質(zhì)相同的保護柱保護柱,確保,確保分離選擇性一致;規(guī)格選擇方面,盡量選擇粒徑一致或者相近的保護柱,且耐壓符合要求,保護柱體積按分析柱體積的5%~10%,保護柱內(nèi)徑應(yīng)與分析柱內(nèi)徑相同或相當。

保護柱的再生一般采用,取下保護柱,在不打開卡套的前提下將保護柱反接(注意此時不能接色譜柱),用10%甲醇水沖洗  30min,然后再用純甲醇沖洗30min。


Question

6.反相色譜分離分析中,流動相添加四氫呋喃有什么作用?四氫呋喃對于色譜柱和儀器有什么影響嗎?

四氫呋喃(THF)在反相色譜中,洗脫能力比甲醇和乙腈要強。實驗結(jié)果表明,在流動相中加入THF能改善某些難分離的物質(zhì)的分離度及峰形。

但是THF也存在不穩(wěn)定,易降解生成過氧化物,從而導(dǎo)致峰形拖尾、峰分裂以及鬼峰;同時過氧化物還可與填料發(fā)生化學(xué)作用,一定程度上,THF會對柱子造成損傷,而且這種損傷隨著時間而累積;再者THF對PEEK有腐蝕作用,因此添加濃度一般不超過20%。


Question

7.鬼峰的主要來源有哪些?

怎么消除?

1. 梯度變化造成的,在紫外低波長檢測的條件下會更容易出現(xiàn),這種鬼峰比較固定;一般磷酸鹽體系更容易出現(xiàn)鬼峰,建議添加鬼峰捕集小柱去除。

2. 儀器中管路有氣泡也會容易產(chǎn)生鬼峰,但這種鬼峰一般保留時間不固定,在進行實驗的時候,首先對流動相進行脫氣處理,同時更換流動相后,對儀器管線進行Purge。

樣品的降解變質(zhì),以及樣品本身可能帶有的,但因樣品批次問題可能不固定出現(xiàn);需要進一步的排查。

流動相、儀器系統(tǒng)(包括手動進樣的進樣針)、色譜柱或樣品污染帶來的,需要沖洗液相色譜系統(tǒng)。

殘留在柱子上,前一陣洗脫不全導(dǎo)致在下一針出峰,從而導(dǎo)致鬼峰,建議更換洗針液。


Question

8.保護柱和在線過濾器都可以起到保護色譜柱的作用,二者有什么區(qū)別?

在線過濾器內(nèi)的濾芯是具有一定孔徑的篩板,死體積更小,只能過濾掉一些大于篩板孔徑的雜質(zhì)。清洗的時候,只要取下篩板超聲即可。

保護柱的卡套中放置的是保護柱芯,柱芯內(nèi)有填料,相較于在線過濾器,死體積更大。保護柱芯不僅能過濾固體雜質(zhì),還能吸附一些強極性、強酸性或者強堿性的物質(zhì),防止色譜柱內(nèi)填料的污染,可以對色譜柱進行保護。


Question

9. 液相色譜柱的接頭

不匹配是什么問題?

通常液相色譜柱的柱頭也有不同類型,常見的有HSS型以及W型,大的差別在于連接所用的接頭管線伸出來長度有差異,HSS型為2.4mm,W型則為3.3mm。當使用一些不銹鋼接頭的時候,接頭卡死導(dǎo)致伸出長度固定,難以匹配不同類型色譜柱。

選擇島津雜化耐高壓接頭,zui高耐壓82Mpa,接頭不會卡死,靈活匹配各種柱頭類型,搭配手擰工具,輕松搞定連接。


Question

10. UPLC色譜柱分離分析也面臨鬼峰干擾,怎樣做到不增加系統(tǒng)體積消除鬼峰?

島津全新升級推出鬼峰吸濾頭—GLC Suction Filter 2,代替原有砂芯濾頭,在不增加儀器系統(tǒng)體積的同時,濾頭中的填料起到有效凈化流動相,吸附流動相中有機雜質(zhì),從而消除鬼峰。





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